槐米是高效豆科植物槐的干燥花蕾，有凉血止血，液相清肝泻火等成果。色谱芦丁为槐米的法测主要活性成份，当初我国医药工业中常以槐米为主要质料提取芦丁，定槐的不断定度评定含量最高可达30%摆布。米中芦丁属于黄酮类化合物，芦丁钻研表明，高效芦丁具备抗心脑血管疾病、液相免疫调节熏染、色谱抗氧化、法测延缓朽迈等熏染。定槐的不断定度评定芦丁可能直接作为药品，米中也用于复配以及药物的芦丁中间体，可用作抗氧剂及做作食用黄色素。高效外洋主要用于食物、化装品的削减剂以及着色剂。

本试验建树了槐米中芦丁含量测定的高效液相色谱措施，参考JJF1059.1-2012《丈量不断定度评定与展现》以及CNAS-GL06《化学合成中不断定度的评估指南》建树数学模子，定量测定不断定度的各个份量，审核影响不断定度的主要因素，开始建树了适用于评估HPLC法测定槐米中芦丁含量不断定度的措施，以期增强对于含量测定服从精确性以及可信度的意见，为样品前处置步骤啰嗦的合成措施建树实用的不断定度评定挨次提供参考。

一、质料与措施

一、质料与试剂

芦丁尺度品（含量HPLC：90.5%）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为合成纯；槐米药材群集于山西、陕西以及广西等地，经山西省林业迷信钻研院张素华低级工程师判断为豆科植物槐SophorajaponicaL的花蕾。

二、仪器与配置装备部署

LC-2010AHT高效液相色谱仪；AB104.N合终日平；KQ3200DE数控超声洗涤器；UPHW-I-90T型优普系列超纯水零星。

三、试验措施

（1）比力品溶液的制备

详尽称取芦丁比力品5.4mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇消融并稀释至刻度，患上0.0979g／L的蕴藏液，4℃冰箱中保存备用。

（2）供试品溶液的制备

称取槐米粗粉约0.1g，详尽称定，置具塞锥形瓶中，详尽退出50mL甲醇，称定份量，超声处置（功率250W，频率25kHz）30分钟，放冷后再称定份量，用甲醇补足减失份量，摇匀，滤过。详尽量取续滤液2mL，置10mL量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过作为供试品溶液。同时以甲醇做空缺比力溶液。

（3）色谱条件

色谱柱：Agela.InnovalC18（4.6妹妹×250妹妹，5μm）反相色谱柱；检测器：紫外检测器；柱温：30℃；流速：1.0mL／min。行动相∶甲醇-1%冰醋酸溶液（32∶68），等度洗脱；检测波长：257nm，进样量：10μL。

四、数学模子

槐米中芦丁的合计公式为：

式中：X为样品中芦丁含量，%；C为供试液中芦丁浓度，g／L；V为供试液体积，mL；m为样品质量，g；F为稀释因子。

五、不断定度源头合成

本措施操作步骤相对于重大，影响因素较多，经由火析全部试验历程的影响因素，并参照含量合计公式，合成不断定源头主要搜罗：样品制备平均度、样品的定容、尺度品、尺度曲线的拟合以及仪器一再性等方面。

二、源头与合成

一、样品制备平均度引入的不断定度

被测样品花蕾差距部位的芦丁含量差距较大，凭证尺度取样措施，将统一批次样品全副破碎捣毁混匀后，称取10份按槐米粗粉约0.1g，详尽称定，置具塞锥形瓶中，详尽退出50mL甲醇，称定份量，超声处置（功率250W，频率25kHz）30分钟，放冷后再称定份量，用甲醇补足减失份量，摇匀，滤过。详尽量取续滤液2mL，置10mL量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过作为供试品溶液。同时以甲醇做空缺比力溶液分说测定，评定样品制备的平均度，测定服从见表1。此外一再性丈量已经搜罗在样品平均度的试验中。

芦丁含量的平均值：X-=18.54%

测定尺度差Sx用贝塞尔公式合计：

样品扩散平均度引入的相对于尺度不断定度u（x）为：

二、样品定容引入的不断定度

（1）由校准引入的尺度不断定度

凭证JJG196—2006《罕用玻璃量具检定例程》，A级50mL单标线吸量管最大允差为±0.050mL，A级2mL分度吸量管最大允差为±0.012mL，A级10mL单标线容量瓶最大允差为±0.020mL，属B类评定，凭证矩形扩散思考，k=根号3，分解校准引入的相对于不断定度：

（2）由温度变更引入的尺度不断定度

在样品处置历程中需量取甲醇50mL、续滤液2mL并定容至10mL，试验室的温度在±4℃之间变更，20℃甲醇体积缩短系数为1.19×10-³／℃。在试验操作时，移液管以及容量瓶中的溶液所处情景的温度差距很小，因此可能漠视不计。假如温度变更是矩形扩散，由温度变更发生的不断定度凭证公式（2）合计，服从为：u（t₁)=0.137,u(t₂)=0.00550,u(t₃)=0.0275

分解温度引入的相对于尺度不断定度：

由上述份量分解样品定容引入的相对于尺度不断定度为：

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